核酸抽出

15問 • 2年前

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核酸は、DNAとRNAのことである。構造に(１)を持つため、(２)に帯電している。つまり、(３)である。 ※+ or - 　水溶性or不溶性

リン酸, -, 水溶性

DNA分解酵素は、ヌクレアーゼという。この酵素は、活性に(１)が必要であるため、このイオンをキレートすることで働きを抑えることができる。

Mg2+

RNAは、(１)によって容易に分解されるため、DNAよりも扱いに注意が必要である。 (１)は、汗、唾液、細胞内、細菌などに存在し、(２)を加えても失活(３)のが特徴。するorしない

RNA分解酵素, 熱, しない

核酸抽出に使用する抗凝固剤は、(１)である。

EDTA

核酸抽出の検体として、最も良いのは(１)である。逆に、(２)は検体として使用"できない"。

白血球, 赤血球

DNAの抽出 (１)法が一般的な方法。 ※間に-

フェノール-クロロホルム

DNAの抽出 ①まず、細胞を壊しDNAを遊離させる。膜を壊す酵素として、(１)溶液と(２)を加える。 ②(３)を加え、タンパク質を変性凝固させ水に溶けないようにした後、遠心する。遠心後、三層に分かれるためDNAを含む(４)層を回収する。 ③再度の除蛋白をするため PCI液を加え遠心後(４)層を回収した後、3M酢酸ナトリウムと(５)または(６)を加え、DNAを沈殿させる。　

SDS, プロテイナーゼK, フェノール, 水, エタノール, イソプロパノール

DNAの抽出細胞膜を壊すためのSDS溶液は、(１)剤である。プロテイナーゼKは、(２)分解酵素である。

界面活性, タンパク質

DNAの抽出再度の除蛋白のためのPCI液は、トリス飽和(１)と(２)とイソアミルアルコールを混合したもの。

フェノール, クロロホルム

DNAの抽出 DNAは水に溶けやすく、つまり油に溶けにくいため、エタノールなどを加えると、凝集し沈殿する。この操作を、通称(１)という。最終的に、上清を除去しTris-EDTA液を加えDNAを溶かし、4℃で保存する。ただし、DNAは分解されにくく頑丈なので、保存するための溶液は水っぽければ何でも良い。

エタ沈

RNAの抽出 (１)法が一般的な方法。 ※略称

AGPC

RNAの抽出 ④細胞を壊し、RNAを遊離させる。細胞を壊す試薬として、(１)を加える。 ⑤酢酸ナトリウムを加えるが、これは(２)条件にするためである。(２)条件下で(３)または(４)を加える。これは蛋白質とDNAの除去を目的としている。 ⑥遠心後、RNAを含む(５)層を回収する。 ⑦(６)または(７)を加え、RNAを沈殿させるを ⑧上清を除去し、75%エタノールで洗浄後、(８)処理水を加え、RNAを溶かし、温度は(９)で保存する。

グアニジンチオシアネート, 酸性, フェノール, クロロホルム, 水, エタノール, イソプロパノール, DEPC, -70℃

RNAの抽出 "強力"なタンパク質変性剤であるグアニジンチオシアネートを加える意味は、(１)を失活させるためである。

RNA分解酵素

RNAの抽出酸性条件下にする理由は、リボースにはデオキシリボースよりも一つ(１)基が多く、H+が多い場では親水性がDNAよりも上がるためである。

RNAの抽出実験において、DEPC処理水を使用する目的はどれか。

RNaseを失活させるため

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リン酸, -, 水溶性

DNA分解酵素は、ヌクレアーゼという。この酵素は、活性に(１)が必要であるため、このイオンをキレートすることで働きを抑えることができる。

Mg2+

RNA分解酵素, 熱, しない

核酸抽出に使用する抗凝固剤は、(１)である。

EDTA

核酸抽出の検体として、最も良いのは(１)である。逆に、(２)は検体として使用"できない"。

白血球, 赤血球

DNAの抽出 (１)法が一般的な方法。 ※間に-

フェノール-クロロホルム

SDS, プロテイナーゼK, フェノール, 水, エタノール, イソプロパノール

DNAの抽出細胞膜を壊すためのSDS溶液は、(１)剤である。プロテイナーゼKは、(２)分解酵素である。

界面活性, タンパク質

DNAの抽出再度の除蛋白のためのPCI液は、トリス飽和(１)と(２)とイソアミルアルコールを混合したもの。

フェノール, クロロホルム

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RNAの抽出 (１)法が一般的な方法。 ※略称

AGPC

グアニジンチオシアネート, 酸性, フェノール, クロロホルム, 水, エタノール, イソプロパノール, DEPC, -70℃

RNAの抽出 "強力"なタンパク質変性剤であるグアニジンチオシアネートを加える意味は、(１)を失活させるためである。

RNA分解酵素

RNAの抽出酸性条件下にする理由は、リボースにはデオキシリボースよりも一つ(１)基が多く、H+が多い場では親水性がDNAよりも上がるためである。

RNAの抽出実験において、DEPC処理水を使用する目的はどれか。

RNaseを失活させるため