その他の方法

19問 • 2年前

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問題一覧

RT-PCR法 (１)を(２)し、DNAに戻した後、PCRにより増幅する。 (３)の検出に有効で、特に(４)の病気に使われている。

RNA, 逆転写, 融合遺伝子, 慢性骨髄性白血病

RT-PCR法 RNAから逆転写されたDNAを(１)という。

cDNA

RT-PCR法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), dNTP, 鋳型RNA, 逆転写酵素(RT), オリゴdTプライマー, ランダムプライマー(ランダムヘキサマー)

RT-PCR法 (m)RNAを鋳型とするため、PCRと異なり、(１)部分のみを増幅することになる。

エキソン

リアルタイムPCR PCRのサイクル毎にPCR産物を(１)によりリアルタイムに検出する方法。 (２)を使用する。電気泳動は必要(３)。であるorでない

蛍光, プローブ, でない

リアルタイムPCR法迅速性と定量性に優れた方法。 (１)と(２)を一体化した装置を用いる。

DNA増幅装置, 分光蛍光光度計

プローブとは、 DNA,RNAの相補性を利用して特定の遺伝子を検出するためのツール。プローブを目的DNAやRNAに結合させる作業を(１)という。

ハイブリダイゼーション

リアルタイムPCR法 TaqManプローブ法による過程を順番通りに選べ

2本鎖DNAが1本鎖になる, プライマーが標的DNAに結合する, TaqManプローブが標的DNAに結合する, プライマーを起点に標的DNAと相補的なDNAが合成される, TaqManプローブが分解される, 蛍光色素が反応液中に遊離し、蛍光が発生する

リアルタイムPCR法 TaqManプローブが蛍光を発する仕組みについて、まず、このプローブには(１)と(２)が結合している。蛍光色素は(１)で、これは(２)が近くにいると、蛍光を(３)。プローブは標的DNAに結合した後、伸長反応時に(４)の(５)活性により分解される。その時、(２)から(１)が離れ、蛍光を(６)ようになるという仕組みである。これにより、目的のDNAが存在するか否かを確認する。 ※３と６は発するor発さない

レポーター, クエンチャー, 発さない, DNAポリメラーゼ, 5'-3'エキソヌクレアーゼ, 発する

リアルタイムPCR法による定量解析 ①濃度既知のDNAのさまざまな濃度でPCRを行う ②指数関数的にDNAが増幅している範囲の中で、関値とした増幅量に達するサイクル数をCt値に設定 ③Ct値と初期濃度の間の検量線をつくる ④濃度未知検体で反応を行い、Ct値に相当する初期DNA量を検量線から求める ⑤DNAの絶対濃度がわかるつまり、何サイクル目で蛍光が検出されたかを見ている。初期DNA─検出したい元のDNA量が多いほど、サイクル数─Ct値は(１)なる。高くor低く

低く

デジタルPCR (１)が不要で、高感度な(２)が可能。

検量線, 絶対定量

シークエンス解析シークエンスとは、(１)を決定すること。ジデオキシ法─サンガー法がよく使われる。

塩基配列

ジデオキシ法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), プライマー, dNTP, DNA, ddNTP

ジデオキシ法[サンガー法] 数千万以上の断片の塩基配列を同時並列的に解読する方法。この方法のおかげで、短時間で大量の配列を解析可能となった。 ddNTPは、3'のOH基がHになっているため、ddNTPが結合すると伸長反応が(１)する。それを利用して、(２)標識ddNTPを使い、それぞれA,T,C,Gがどのくらいの短い鎖ができたかどうかでどの塩基がどの位置に来るかを計測している。

ストップ, 蛍光

SNP解析一塩基多型[バリアント]の解析。 (１)法が使われる。

RFLP

RFLP法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), プライマー, dNTP, DNA, 制限酵素

制限酵素 (１)の一種。DNA配列の決まったところを切断し、しかもできたDNAは末端同士で簡単に接着するという性質がある。

エンドヌクレアーゼ

マイクロアレイ法スライドガラス上にDNA(１)をスポットし、細胞の抽出RNAから合成したターゲットをハイブリダイスさせる。発現量が多いと蛍光強度が大きくなる。

プローブ

核酸増幅法(NAT)で使用される

PCR法, LAMP法

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RNA, 逆転写, 融合遺伝子, 慢性骨髄性白血病

RT-PCR法 RNAから逆転写されたDNAを(１)という。

cDNA

RT-PCR法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), dNTP, 鋳型RNA, 逆転写酵素(RT), オリゴdTプライマー, ランダムプライマー(ランダムヘキサマー)

RT-PCR法 (m)RNAを鋳型とするため、PCRと異なり、(１)部分のみを増幅することになる。

エキソン

リアルタイムPCR PCRのサイクル毎にPCR産物を(１)によりリアルタイムに検出する方法。 (２)を使用する。電気泳動は必要(３)。であるorでない

蛍光, プローブ, でない

リアルタイムPCR法迅速性と定量性に優れた方法。 (１)と(２)を一体化した装置を用いる。

DNA増幅装置, 分光蛍光光度計

プローブとは、 DNA,RNAの相補性を利用して特定の遺伝子を検出するためのツール。プローブを目的DNAやRNAに結合させる作業を(１)という。

ハイブリダイゼーション

リアルタイムPCR法 TaqManプローブ法による過程を順番通りに選べ

レポーター, クエンチャー, 発さない, DNAポリメラーゼ, 5'-3'エキソヌクレアーゼ, 発する

低く

デジタルPCR (１)が不要で、高感度な(２)が可能。

検量線, 絶対定量

シークエンス解析シークエンスとは、(１)を決定すること。ジデオキシ法─サンガー法がよく使われる。

塩基配列

ジデオキシ法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), プライマー, dNTP, DNA, ddNTP

ストップ, 蛍光

SNP解析一塩基多型[バリアント]の解析。 (１)法が使われる。

RFLP

RFLP法使用するもの

Taqポリメラーゼ(耐熱性DNAポリメラーゼ), Mg2+(MgCl), プライマー, dNTP, DNA, 制限酵素

制限酵素 (１)の一種。DNA配列の決まったところを切断し、しかもできたDNAは末端同士で簡単に接着するという性質がある。

エンドヌクレアーゼ

プローブ

核酸増幅法(NAT)で使用される

PCR法, LAMP法