미생물이나 동식물 세포를 증식 시키기 위해 고안된 액체나 고체(gel)상태의 영양원

동식물 세포를 배양하기 위한 영양원

대장균, 효모 등과 같은 미생물을 배양하기 위한 영양원

특정 생물의 추출물, 단백질 가수분해물 등 화학적 성분이 분명하지 않으나 자연에서 유래된 재료를 이용하여 만든 배지

여러 화합물을 넣어 만든 배지

첨가한 화합물의 종류와 농도를 규명할 수 있는 배지

조성을 알 수 없는 복합 화합물(예:peptide, yeast extract, FBS 등등)이 쓰여 이를 규명할 수 없는 배지.

특정 미생물을 선택적으로 배양하기 위해, 그 미생물만이 이용할 수 있는 영양 물질을 포함하여 만든 배지(Samonella-Shingella 배지)

특정 미생물을 다른 종류의 미생물과 구별하기 위해 배지에 특수한 생화학적 지시약을 넣은 배지. (EMB등)

한천(Agar)이 들어가 있지 않은 액상 형태의 배지, 세포를 대량으로 배양할 목적으로 사용.

한천이 들어가 있는 고체형태의 배지로 특정 세포를 선별한 목적으로 사용. 평판배지, 사면배지, 고층배지로 나뉨

대장균 배양에 가장 대중적으로 사용되는 배지

LB 배지에 KCl 및 MgCl2를 추가하여 변형한 배지

SOB 배지에 세포증식에 도움을 주기 위해 Glucose를 첨가하여 효율을 더 올린 배지

LB 배지에 들어가는 효모 추출물과 Tryptone의 양을 2배로 늘려준 고영양분 배지

2x YT보다 더 많은 효모 추출물과 Tryptone을 넣어준 배지

LB 배지에 들어가는 효모 추출물과 Tryptone의 양을 매우 많이 늘려줌과 동시에 대장균이 성장하면서 생기는 부산물로 인해 배지가 산성이 되는 것을 막기위해 인산 완충용액이 들어가 있는 배지

세포가 살아갈 수 있는 최소한의 영양분을 넣어서 만든 배지

Vector와 재조합 된 목적하는 DNA(insert)를 숙주세포에 넣어주는 과정

형질전환이 숙주세포가 대장균(원핵세포)인 경우

형질전환이 진핵세포인 경우

최초의 형질전환실험

형질전환의 물리적 방법 중 한가지

형질전환에서 생물학적 방법에 사용하는 미생물은?

Ca2+에 의해, (+) charge화 된 세포벽을 열을 통해 열어 줌으로써, DNA가 도입될 수 있게 하는 방법

주변에 염이 없는 상태에 존재하는 세포에, (-) 전하를 띈 주입할 DNA를 넣어준 후, 매우 짧은 (msec)의 전기를 흘려주어, 순간적으로 DNA가 세포 내부로 들어가게 하는 방법

➢ 칼슘염 방법의 이것은 CaCl2 용액에 들어가 있음. ➢ 전기천공법의 이것은 무염상태의 용액에 들어 있음.

유전자 돌연변이를 일으킬 수 있는 효소들과 DNA 가수분해를 일으킬 수 있는 효소들이 결여된 세포.

단백질 발현양을 늘린 형태로 변형이 되었거나, 단백질 가수분해 효소가 결여된 세포.

대장균 RNA polymerase 보다 전사 효율이 높은 T7 RNA polymerase를 생산할 수 있는 유 전자를 가진 세포.

원핵생물과 진핵생물의 codon 선호도를 기반으로 대장균에서 선호도가 낮은 codon들의 tRNA 생산을 유도하는 유전자를 가진 세포.

산소의 이동이 적어 환원 조건인 cytosol을 산화 조건으로 만들어 줄 수 있는 Thioredoxin, Glutathione reductase 등의 단백질을 발현하는 유전자를 가진 세포.

Vector에서 다양한 제한효소 인식부위

Vector에서 plasmid가 삽입된 세포만 선별하는 용도

Vector에서 plasmid 스스로 복제할 수 있는 능력 제공

Vector에서 Blue-white selection 가능하게 하는 유전자( 필수는 아님)

형질전환을 통해 넣어준 목적하는 유전자에 암호화(coding)되어 있는 단백질을 형질전환 세포 내에 발현화는 과정.

대장균의 단백질 발현 시스템은 ( )을 기반으로 한다.

원핵생물 내에 존재하는 유전자로써, 특정 단백질군을 발현하기 위해 필요한 유전자 요소들의 집합

항상 일정하게 전사를 유지하는 promoter

외부 요인에 의해 전사가 조절되는 promoter

도입된 유전자의 발현양이 과도하게 많거나, 발현을 통해 생산된 단백질이 세포에 독성을 띄는 경우 발생하는 현상.

- 대장균의 젖당 오페론 (lac operon)에서 쓰이는 promoter - Lac repressor에 의해서 발현이 억제되어 있다가, 젖당 또는 젖당 유사체 (주로 IPTG)가 존재 시 발현이 촉진되는 promoter.

젖당 유사체로, 매우 안정적일 뿐만 아니라 Lac repressor에 매우 강하게 결합하여 활성을 억제시킴

T7 bacteriopharge RNA polymerase(T7 RNA polymerase)가 결합하는 promoter

미생물 생장 시 단백질 발현의 영향을 주는 요인 중 하나

분광광도계 (Spectrophotometry)를 이용하여, 탁도에 따른 빛의 분산정도를 확인하여 미생물의 생장을 확인. 보통 흡광도로 표현하여 측정함

목적 유전자를 넣은 세포를 기르고, 이를 이용하여 발현하는 단계.

유전자 발현을 통해 생성된 단백질을 분리하고 정제한 단계

세포를 파쇄할 수 있는 계면활성제(detergent)를 처리하는 방법 → 단백질의 변성을 막기 위해 mild detergent를 사용함. (Sugar backbone detergent)

세포벽을 파쇄할 수 있는 효소를 처리하는 방법.

반복적 결빙과 해빙 (Freezing and Thawing), 삼투압 충격 (Osmotic shock) 등 기계를 쓰지 않는 방법과 초음파 (Sonicator), 액상 분쇄기 (Wet mil), 고압 균질기 (High pressure homogenizer), 미세 유동체 (Microfluidizer)등 세포에 충격을 주는 기계를 쓰는 방법이 있음.

모든 화학분야에서 특정한 물질을 분리할 때 사용되는 방법. 시료의 혼합액을 이동상과 함께 고정상에 흘려 보내면, 시료의 특징에 따라 통과하는 속도가 다름을 이용해, 분리하는 방법

크로마토그래피에서 단백질이 존재하는 세포 파쇄액 + 염이 있는 완충액

크로마토그래피에서 Column 안에 존재하는 움직이지 않는 resin

목적하는 단백질과 결합하는 물질을 resin에 붙여서, 단백질과 물질 간의 친화도를 이용하여 단백질을 정제하는 방법.

금속과 배위 결합하고 있는 NTA와 Histidine과의 결합력을 이용한 his-tag 단백질 정제방법.

➢ 단백질의 특성을 연구하는 가장 기본적인 Tool. ➢ 단백질의 분자량에 의한 밴드로 분리 ➢ 원하는 단백질의 발현 여부 확인 및 대략적인 MW 추정 ➢ 단백질의 상대적인 분자량을 측정하고, 원하지 않는 Impurity의 정도와 그 MW를 추정.

(1)는 Solution속의 전체 단백질을 측정하는 실험인 반면 (2)는 내가 원하는 물질(항체 혹은 단백질)만의 농도를 측정하기 위해 사용한다.

ELISA 중 항원을 직접 검출하는 방법

ELISA 중 항원과 결합하는 항체에 2차 항체를 붙여서 검출

ELISA 중 가장 특이성이 높음

면역반응을 통해 항체 생성을 유발하는 물질로서 항체가 결합하는 Epitope를 포함하고 있음. Epitope는 선형 펩타이드일 수도 있고 고차원 구조를 가질수도 있음.

항원에 대한 면역반응으로 B세포에서 생성되어 항원의 epitope와 결합하는 면역 단백질. 그 Specificity와 결합력이 아주 높음

주로 Mouse, Rat과 같은 소동물에 항원을 투여하여 항체를 생산하는 B세포 단일클론으로 부터 나오는 항체.

항원에 붙을 수 있는 여러 종류의 항체 집합

질량분석기를 이용해 단백질의 MW를 정확하게 측정하는 실험

단백질 구조의 Hydrophobicity에 따라 분리하는 방법

-HPLC를 이용해 단백질의 크기에 따라 분리하는 Tool -여러가지 Pore size를 가지는 물질을 이용하여 분리하는 방법.